Untersuchungsmaterial
Gewebeschnitte, die elastische und kollagene Fasern besitzen.
Ziel der Untersuchung
Nach der hier beschriebenen Methode lassen sich elastische Fasern u.a. innerhalb der Gefäßwände färberisch darstellen. Hinzu kommt, dass auch die kollagenen Fasern sichtbar werden.
Prinzip der Färbung
Elastische Fasern enthalten Elastomucin, welches stark sauer ist und die Spannung in den Fasern bewirkt. An diese saure Komponente lagert sich der basische Farbstoff Resorcin-Fuchsin aufgrund von Grenzflächen- und Elektroadsorption an. Kernfärbung: Das 3-wertige Eisen bildet unter Oxidation des Hämatoxylins einen Eisenhämateinlack. Durch die Bereitschaft der Kerne Eisen aufzunehmen, kommt es zur Anfärbung. Das VanGieson-Gemisch enthält den gelben, feindispersen Farbstoff Pikrinsäure und den roten, grobdispersen Farbstoff Säurefuchsin. Durch unterschiedliche Dispersität und Diffusionsgeschwindigkeit der beiden Farbstoffe kommt es zur getrennten Darstellung von Strukturen, wenn man die Färbung nach kurzer Zeit unterbricht.
Durchführung
| Schnitte in Xylol entparaffinieren* | 2 x 10 Min |
| Objektträger über die absteigende Alkoholreihe** bis zum 80%igen Isopropanol überführen | je ca 1 Min |
| Objektträger in Resorcin-Fuchsin-Lösung überführen | 15-30 Min |
| mehrmaliges Eintauchen in Aqua dest. zum Befreien von überschüssigen Farbresten | 30 sec - 2 Min |
| Objektträger in 70%igem Isopropanol spülen | kurz |
| Objektträger in Hämatoxylin n. Weigert überführen | 10 Min |
| Bläuen in Leitungswasser, Kalt/warm | 10 Min/ 5 Min |
| Differenzieren der Kernfärbung in HCl-Alkohol (wenn nötig) | kurz |
| Objektträger in Aqua dest. abspülen | 30 sec - 2 Min |
| Objektträger in Van-Gieson-Gemisch überführen | 7-10 Min |
| Objektträger direkt in 96%igen Isopropanol der aufsteigenden Alkoholreihe***, Xylol zum Entwässern, Aufhellen und Härten der Schnitte | |
| Eindecken mit wasserunlöslichem Einschlußmittel | |
*Entparaffiniert: Xylol: 100% - 2x schwenken; Isopropanol: 96%- 2x/70% - 1x insgesamt jeweils 3x
**Absteigende Alkoholreihe: mehrmaliges Eintauchen; umgekehrte Reihenfolge s.o.
***Aufsteigende Alkoholreihe: Xylol 70%/96%/100%
Färbeergebnis
| Kerne | braun-schwarz |
| Elastische Fasern | blau-schwarz |
| Cytoplasma/Muskulatur | gelb |
| Collagenes Bindegewebe | rot |
| Erythrozyten | gelb-grün |
Untersuchungsmaterial Gewebeschnitte, die elastische und kollagene Fasern besitzen. Ziel der Untersuchung Nach der hier beschriebenen Methode lassen sich elastische Fasern u.a. innerhalb...
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Gewebeschnitte, die elastische und kollagene Fasern besitzen.
Ziel der Untersuchung
Nach der hier beschriebenen Methode lassen sich elastische Fasern u.a. innerhalb der Gefäßwände färberisch darstellen. Hinzu kommt, dass auch die kollagenen Fasern sichtbar werden.
Prinzip der Färbung
Elastische Fasern enthalten Elastomucin, welches stark sauer ist und die Spannung in den Fasern bewirkt. An diese saure Komponente lagert sich der basische Farbstoff Resorcin-Fuchsin aufgrund von Grenzflächen- und Elektroadsorption an. Kernfärbung: Das 3-wertige Eisen bildet unter Oxidation des Hämatoxylins einen Eisenhämateinlack. Durch die Bereitschaft der Kerne Eisen aufzunehmen, kommt es zur Anfärbung. Das VanGieson-Gemisch enthält den gelben, feindispersen Farbstoff Pikrinsäure und den roten, grobdispersen Farbstoff Säurefuchsin. Durch unterschiedliche Dispersität und Diffusionsgeschwindigkeit der beiden Farbstoffe kommt es zur getrennten Darstellung von Strukturen, wenn man die Färbung nach kurzer Zeit unterbricht.
Durchführung
| Schnitte in Xylol entparaffinieren* | 2 x 10 Min |
| Objektträger über die absteigende Alkoholreihe** bis zum 80%igen Isopropanol überführen | je ca 1 Min |
| Objektträger in Resorcin-Fuchsin-Lösung überführen | 15-30 Min |
| mehrmaliges Eintauchen in Aqua dest. zum Befreien von überschüssigen Farbresten | 30 sec - 2 Min |
| Objektträger in 70%igem Isopropanol spülen | kurz |
| Objektträger in Hämatoxylin n. Weigert überführen | 10 Min |
| Bläuen in Leitungswasser, Kalt/warm | 10 Min/ 5 Min |
| Differenzieren der Kernfärbung in HCl-Alkohol (wenn nötig) | kurz |
| Objektträger in Aqua dest. abspülen | 30 sec - 2 Min |
| Objektträger in Van-Gieson-Gemisch überführen | 7-10 Min |
| Objektträger direkt in 96%igen Isopropanol der aufsteigenden Alkoholreihe***, Xylol zum Entwässern, Aufhellen und Härten der Schnitte | |
| Eindecken mit wasserunlöslichem Einschlußmittel | |
*Entparaffiniert: Xylol: 100% - 2x schwenken; Isopropanol: 96%- 2x/70% - 1x insgesamt jeweils 3x
**Absteigende Alkoholreihe: mehrmaliges Eintauchen; umgekehrte Reihenfolge s.o.
***Aufsteigende Alkoholreihe: Xylol 70%/96%/100%
Färbeergebnis
| Kerne | braun-schwarz |
| Elastische Fasern | blau-schwarz |
| Cytoplasma/Muskulatur | gelb |
| Collagenes Bindegewebe | rot |
| Erythrozyten | gelb-grün |
