Untersuchungsmaterial
Untersuchungsmaterial ist hier Muskel- oder Gehirngewebe.
Ziel der Untersuchung
Die hier beschriebene Färbemethode dient zum Nachweis einer myofibrillären Degeneration, z.B. im Herzmuskelgewebe.
Prinzip der Färbung
Das vorgewärmte Luxol-Fast-Blue (56 – 60 C, Kupferphtalocyanin) hat eine besondere Affinität zum Myelin, es soll zur Anlagerung an das Neurokeratin-Gerüst kommen, welches ein feinmaschiges Netz ist, das bei der Fixierung durch Herauslösen von Marklipoiden entsteht.
Die Kerne werden durch den Indikatorfarbstoff Kernechtrot gefärbt.
Durchführung
| Schnitte in Xylol entparaffinieren* | 2 x 10 Min |
| Objektträger über die absteigende Alkoholreihe** nur bis zum 96%igen Isopropanol durch mehrmaliges Eintauchen überführen | je ca 1 Min |
| Objektträger in Luxol-Fast-Blue-Lösung (56 – 60 C) überführen | 2 h |
| Objektträger in 70%ige Isopropanol- Lösung überführen | 2 Min |
| Objektträger von überschüssigen Farbresten durch mehrmaliges Eintauchen in Aqua dest. befreien | 30 sec - 2 Min |
| Objektträger in Lithiumcarbonat-Lösung überführen | 10-30 sec |
| Objektträger von überschüssigen Farbresten befreien durch mehrmaliges Eintauchen in Aqua dest | 30 sec - 2 Min |
| 0,1%ige Kernechtrot-Lösung | 5-15 Min |
| Objektträger von überschüssigen Farbresten befreien durch mehrmaliges Eintauchen in Aqua dest | 30 sec - 2 Min |
| aufsteigende Alkoholreihe*** ab dem 96%igen Alkohol, Xylol zum Entwässern, Aufhellen und Härten der Schnitte. | |
| Eindecken mit wasserunlöslichem Einschlußmittel. | |
*Entparaffiniert: Xylol: 100% - 2x schwenken; Isopropanol: 96%- 2x/70% - 1x insgesamt jeweils 3x
**Absteigende Alkoholreihe: mehrmaliges Eintauchen; umgekehrte Reihenfolge s.o.
***Aufsteigende Alkoholreihe: Xylol 70%/96%/100%
Färbeergebnis
| Muskelgewebe | blass rot |
| Kerne | rot |
| Myofibrilläre Degeneration, Markscheiden | blau-türkis |
Untersuchungsmaterial Untersuchungsmaterial ist hier Muskel- oder Gehirngewebe. Ziel der Untersuchung Die hier beschriebene Färbemethode dient zum Nachweis einer myofibrillären...
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Untersuchungsmaterial ist hier Muskel- oder Gehirngewebe.
Ziel der Untersuchung
Die hier beschriebene Färbemethode dient zum Nachweis einer myofibrillären Degeneration, z.B. im Herzmuskelgewebe.
Prinzip der Färbung
Das vorgewärmte Luxol-Fast-Blue (56 – 60 C, Kupferphtalocyanin) hat eine besondere Affinität zum Myelin, es soll zur Anlagerung an das Neurokeratin-Gerüst kommen, welches ein feinmaschiges Netz ist, das bei der Fixierung durch Herauslösen von Marklipoiden entsteht.
Die Kerne werden durch den Indikatorfarbstoff Kernechtrot gefärbt.
Durchführung
| Schnitte in Xylol entparaffinieren* | 2 x 10 Min |
| Objektträger über die absteigende Alkoholreihe** nur bis zum 96%igen Isopropanol durch mehrmaliges Eintauchen überführen | je ca 1 Min |
| Objektträger in Luxol-Fast-Blue-Lösung (56 – 60 C) überführen | 2 h |
| Objektträger in 70%ige Isopropanol- Lösung überführen | 2 Min |
| Objektträger von überschüssigen Farbresten durch mehrmaliges Eintauchen in Aqua dest. befreien | 30 sec - 2 Min |
| Objektträger in Lithiumcarbonat-Lösung überführen | 10-30 sec |
| Objektträger von überschüssigen Farbresten befreien durch mehrmaliges Eintauchen in Aqua dest | 30 sec - 2 Min |
| 0,1%ige Kernechtrot-Lösung | 5-15 Min |
| Objektträger von überschüssigen Farbresten befreien durch mehrmaliges Eintauchen in Aqua dest | 30 sec - 2 Min |
| aufsteigende Alkoholreihe*** ab dem 96%igen Alkohol, Xylol zum Entwässern, Aufhellen und Härten der Schnitte. | |
| Eindecken mit wasserunlöslichem Einschlußmittel. | |
*Entparaffiniert: Xylol: 100% - 2x schwenken; Isopropanol: 96%- 2x/70% - 1x insgesamt jeweils 3x
**Absteigende Alkoholreihe: mehrmaliges Eintauchen; umgekehrte Reihenfolge s.o.
***Aufsteigende Alkoholreihe: Xylol 70%/96%/100%
Färbeergebnis
| Muskelgewebe | blass rot |
| Kerne | rot |
| Myofibrilläre Degeneration, Markscheiden | blau-türkis |
